- 品名： TaKaRa 定點突變操作的試劑盒
- 品牌： TaKaRa
- 型號： R401
- 產(chǎn)品詳情
- 規(guī)格參數(shù)
商品名稱：TaKaRa MutanBEST Kit
商品編號：SPU2021050590
上架時間：2022-01-04
| ■ 制品內(nèi)容 (20 次量) |
| Pyrobest DNA Polymerase (5 U/μl)15 μl10×Pyrobest Buffer II200 μldNTP Mixture (2.5 mM each)180 μl10×Blunting Kination Buffer50 μlBlunting Kination Enzyme Mix25 μlLigation Solution I*150 μl * Ligation Solution I 即為Ligation Kit Ver.2.1 的一種組份。 |
| ■ 制品說明 |
| 本制品是利用PCR技術(shù)進行定點突變操作的試劑盒。其原理是利用導(dǎo)入變異點的引物進行PCR反應(yīng)后，對PCR產(chǎn)物進行末端平滑化及5’磷酸 (P) 化處理，再用高效連接試劑Ligation Solution I進行自身連接 (環(huán)化反應(yīng))，然后轉(zhuǎn)化、提取突變體DNA。本試劑盒的原理十分簡單，但Taq酶在PCR過程中的錯配率限制了這一技術(shù)的應(yīng)用?，F(xiàn)在，Takara的Pyrobest DNA Polymerase使這一技術(shù)得到了很好的發(fā)揮。Pyrobest DNA Polymerase不僅具有很高的保真性（Fidelity），并且和TaKaRa Taq具有同樣的擴增效率。與其他突變試劑盒相比，本試劑盒的特點是操作方便、簡單，只需一天時間便可完成整個操作，并且不受載體、宿主菌的限制。 ■ 保存-20℃。 ■ TaKaRa MutanBEST Kit原理試劑盒原理見下圖，全套操作約需5小時，簡單說明如下。1. 設(shè)計一對5’端鄰接，3’端方向相反的引物用以導(dǎo)入變異點。2. 進行PCR擴增 (使用高保真DNA聚合酶Pyrobest DNA Polymerase)。3. PCR片段的末端平滑及5’末端磷酸化反應(yīng) (在同一反應(yīng)體系內(nèi)進行，反應(yīng)只需10分鐘)。4. 自身連接反應(yīng) (使用本試劑盒中的DNA高效連接液Ligation Solution I，連接反應(yīng)只需30 分鐘至1小時)。5. 質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化，挑選變異體。 |
| ■ 注意事項 |
| 1. 當(dāng)載體與插入的DNA片段的總長度小于5 kb時，使用本試劑盒較為合適；如果載體與插入DNA 片段長度太長時，不推薦使用本試劑盒。 2. PCR反應(yīng)后的DNA片段應(yīng)進行切膠回收純化，然后再進行自身連接反應(yīng)，這樣可以提高突變成功率。 3. Ligation Solution I請于冰中融解，使用前混勻。應(yīng)避免多次反復(fù)凍融。 4. 連接轉(zhuǎn)化效率低時，請試用下述方法進行改進。 ① 確認(rèn)感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。 ② 延長連接反應(yīng)時間至過夜反應(yīng)。 |
| TaKaRaMutanBESTKit | |||
| 品牌 | CodeNo. | 產(chǎn)品名稱 | 包裝量 |
| Takara | R401 | TaKaRaMutanBESTKit | 20次 |
暫無內(nèi)容...
