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產(chǎn)品目錄

TaKaRa SPP System?冷休克表達(dá)載體 IV

品名: TaKaRa SPP System?冷休克表達(dá)載體 IV
品牌: TaKaRa
型號(hào): 3370
  • 產(chǎn)品詳情
  • 規(guī)格參數(shù)
■ 制品內(nèi)容
SPP System Set (Code No.: 3366)
1. SPP System Set
   pCold I (SP-4) DNA、pCold II (SP-4) DNA
   pCold III (SP-4) DNA、pCold IV (SP-4) DNA
各20 μg
2. pMazF DNA (20 ng/μl)0.5 μg
3. pCold I (SP-4) envZB DNA (20 ng/μl)0.2 μg


SPP System IIV (Code No.: 33673370)
1. pCold IIV (SP-4) DNA中一個(gè)(0.5 μg/μl)20 μg
2. pMazF DNA (20 ng/μl)0.5 μg
3. pCold I (SP-4) envZB DNA (20 ng/μl)0.2 μg




■ GenBank登錄
     Accession No.     pCold I (SP-4) DNAAB248600     pCold II (SP-4) DNAAB248601     pCold III (SP-4) DNAAB248602     pCold IV (SP-4) DNAAB248603 ■ 鏈長(zhǎng)        pCold I (SP-4) DNA4,407 bp     pCold II (SP-4) DNA4,392 bp     pCold III (SP-4) DNA4,377 bp     pCold IV (SP-4) DNA4,359 bp

■ 制品說明
根據(jù)美國(guó)新澤西州醫(yī)學(xué)與牙科大學(xué)的井上正順博士小組的研究,大腸桿菌的蛋白質(zhì)MazF是一種能夠識(shí)別并切斷單鏈RNA特定序列 (ACA) 的核酸內(nèi)切酶 (mRNA Interferase)。利用MazF可以抑制宿主蛋白質(zhì)表達(dá),只表達(dá)目的蛋白質(zhì)。利用這一技術(shù),開發(fā)了Single Protein Production (SPP) System。在SPP System中,在保持氨基酸序列不變的情況下用非ACA序列置換目的基因中的ACA序列,然后與MazF基因共表達(dá)。大部分宿主蛋白的mRNA因?yàn)橛蠥CA序列而被MazF分解,表達(dá)被抑制,但是目的基因的轉(zhuǎn)錄mRNA中不含有ACA序列,不能被MazF切斷,從而使目的蛋白得到高效表達(dá)。由于目的蛋白質(zhì)的不同,也有比單純使用冷休克表達(dá)載體進(jìn)行表達(dá)時(shí)表達(dá)量低的情況。構(gòu)建SPP系統(tǒng),首先需要通過化學(xué)合成或點(diǎn)突變的方法制備無ACA序列的目的基因。設(shè)計(jì)無ACA基因的時(shí)候,在確保氨基酸序列不變的情況下將ACA序列替換,同時(shí)加入必須的酶切位點(diǎn)。其次,將無ACA基因克隆至含有無ACA轉(zhuǎn)錄區(qū)域的pCold (SP-4) 載體中。至此,用于目的片段的SPP系統(tǒng)表達(dá)的載體準(zhǔn)備完畢,將其與能夠表達(dá)足量的MazF的pMazF載體共轉(zhuǎn)化至E.coli中,形成了目的片段的SPP。SPP System用的冷休克表達(dá)載體與pCold冷休克表達(dá)載體一樣,根據(jù)TEE序列、His tag和Factor Xa酶切位點(diǎn)序列有無,分成4個(gè)載體,分別是pCold I~I(xiàn)V (SP-4) DNA,pCold IV (SP-4)在多克隆位點(diǎn)的上游沒有附加的序列。 ■ 保存-20℃。 ■ 特長(zhǎng)同位素標(biāo)記方便:標(biāo)記的目的蛋白質(zhì)最大可達(dá)到宿主胞內(nèi)新生蛋白質(zhì)的90%。使用宿主廣泛:CspA啟動(dòng)子來源于大腸桿菌,所以大部分的大腸桿菌都可作為宿主使用。因?yàn)楣脖磉_(dá)用載體pMazF DNA的篩選標(biāo)記是氯霉素,所以具有氯霉素抗性的大腸桿菌 (例如:Rosseta等)不能作為宿主使用。 ■ 純度用于pCold (SP-4) DNA系列載體。1. 用雙脫氧測(cè)序法確認(rèn)多克隆位點(diǎn)。2. 確認(rèn)多克隆位點(diǎn)上的限制酶Nde I, Sac I, Kpn I, Xho I, BamH I, EcoR I, Hind III, Sal I, Pst I 和Xba I只有一個(gè)酶切位點(diǎn)。


■ SPP System 原理圖

■ SPP System冷休克表達(dá)載體圖譜
 TEE序列His tag序列Factor Xa切斷序列pCold I (SP-4) DNA○○○pCold Ⅱ (SP-4) DNA○○×pCold Ⅲ (SP-4) DNA○××pCold Ⅳ (SP-4) DNA×××


■ MazF表達(dá)質(zhì)粒pMazF DNA載體圖譜

SPPSystem?Set
品牌CodeNo.產(chǎn)品名稱包裝量
Takara3366SPPSystem?Set1Set
Takara3367SPPSystem?I1Set
Takara3368SPPSystem?II1Set
Takara3369SPPSystem?III1Set
Takara3370SPPSystem?IV1Set


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